CELI 효소는 단일 가닥 및 이중 가닥 모두를 특이적으로 인식하는 특정 뉴클레아제입니다. 현재 CELI 효소는 주로 샐러리에서 추출됩니다. 이 효소는 불일치 염기를 특이적으로 절단할 수 있으며 돌연변이 검출 분야에서 널리 사용됩니다. 전통적인 이론은 효소의 촉매 활성이 Mg ²⁺ 와 Zn ²⁺ 만 필요하다고 믿습니다 . Dithiothreitol, 영어 이름 DL-Dithiothreitol, DDT 로 약칭 , 분자식은 C ₄ H ₁₀ O ₂ S ₂ , 분자량은 154.25로 환원제로 자주 사용되며 항산화 효과가 있습니다. 오늘은 CELI 계열 효소 소화 완충액 제조에 DTT를 적용한 방법을 소개하겠습니다.

CELI 계열 효소 분해 완충액은 DTT, BSA(소 혈청 알부민), 0.02% Triton X-100, 0.1M KCl 및 HEPES 완충액으로 구성되며, 그 중:

DTT가 포함된 CELI family 효소 분해 버퍼는 Mutation Detection Kit-S100 키트 버퍼와 DTT로 구성되어 있습니다. Mutation Detection Kit-S100 키트 버퍼는 Universal Gene Corporation의 제품이며 카탈로그 번호는 706025입니다.

CELI 계열 효소 소화 완충액에서 DTT의 농도는 0.01-0.5mM, 0.5-10mM 또는 0.01-6mM입니다.

BSA 농도는 2ug/ml입니다.

HEPES 버퍼의 농도는 0.1M이고 PH는 7.5입니다.

새로운 촉매 활성 물질 DTT는 특히 낮은 풍부 돌연변이의 검출을 위해 CELI의 활성을 더욱 향상시킬 수 있습니다. 전통적인 효소 소화 방법과 비교하여 본 발명의 방법은 더 민감하고 DTT의 최종 농도는 0.01-10mM 범위입니다. 둘 다 CELI 효소와 CELII 효소의 검출 감도를 향상시킬 수 있습니다. 특정 암 유전자와 같은 미지의 돌연변이체의 풍부함을 검출하는 것은 좋은 검출 효과를 갖는다. 특히 TILLING 기술 플랫폼이 돌연변이 집단을 감지할 때 명백한 이점이 있습니다. PCR 정제 단계를 단순화할 뿐만 아니라 검출 분해능도 향상시킵니다.

참고문헌