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1. 단백질 전달이 필요한 이유는 무엇입니까?
웨스턴 블랏은 단백질이 막으로 옮겨져 항체를 사용하여 검출되는 방법입니다. 알려진 발현 단백질의 경우 해당 항체를 검출 용 1 차 항체로 사용할 수 있으며 새로운 유전자의 발현 산물은 항체의 융합 부위에서 검출 할 수 있습니다.
페이지 상으로 분리 된 단백질 시료를 고상 담체 (예를 들면, 니트로 셀룰로오스 막)에 옮기고, 고상 담체가 비공유 결합으로 단백질을 흡착하고, 폴리펩티드의 종류 및 그 생물 활성을 유지할 수있다. 고상 담체상의 단백질 또는 폴리 펩타이드를 항원으로 사용하여 해당 항체를 면역 반응시킨 후 효소 또는 동위 원소 표지 된 2 차 항체와 반응시켜 특정 발현 단백질을 기질 발색 또는 오토 라디오.
2. 불완전한 이전의 이유와 해결책
원인
필름이 완전히 흠뻑 젖지 않았다.
100 % 메탄올 투과 막 사용
표적 단백질의 분자량이 10,000 미만
작은 구멍 크기의 멤브레인을 선택하여 이동 시간 단축
목적 단백질의 등전점은 전달 완충액의 ph와 같거나 근접하다
메탄올 농도가 너무 높음
과량의 메탄올 농도는 단백질을 sds로부터 분리시키고, 이에 의해 겔에서 침강하면서 겔을 수축 또는 경화시킴으로써 고 분자량 단백질의 전달을 억제한다. 메탄올 농도를 줄이거 나 대신 에탄올 또는 이소프로판올을 사용하십시오.
불충분 한 전송 시간
두꺼운 겔 및 고 분자량 단백질의 연장 된 이동 시간
3. 준비 방법대문자cas 1135-40-6) 버퍼
다음 표를 참조하십시오 (버퍼와 수산화 나트륨의 농도는 모두 0.1 mol / l 임).
ph 캡 버퍼
볼륨 (대문자)
볼륨 (naoh)
6.8
250
0
10.0
218.3
31.7
10.5
178.6
71.4
10.8
156.3
93.7
11.2
138.9
111.1
제제의 구체적인 조작은 0.1 mol / l모자완충 용액을 부피 플라스크에서 먼저 제조한다. 구성 과정 중에, 완충액은 고온에서 탈수되고 데시 케이 터에서 냉각되어야하며; 0.1 mol / l의 수산화 나트륨 용액도 동시에 제형 화된다. 상기 표의 식에 따라, ph에 상응하는 완충액을 제조 할 수 있고, 수산화 나트륨이 주로 ph를 조절하는데 사용된다.
웨스턴 블 랏팅은 단백질 혼합물로부터 표적 단백질을 검출하고, 세포 또는 조직에서 단백질의 발현을 정량적 또는 정 성적으로 결정하고,이어서 단백질 - 단백질, 단백질 - DNA 및 단백질 - rna 상호 작용을 분석하는데 적용될 수있다. 필름 전송은 wb의 기초이며, 그 품질은 wb의 성공의 열쇠입니다. 위의 방법으로 transfor 과정에서 성공하는 데 도움이되기를 바랍니다.
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