모든 종류의 세포, 단백질 및 DNA 실험에서 일단 성분이 자연 생물학적 환경을 벗어나면 심각하게 영향을받을 것입니다. 그들에게 좋은 자연 환경을 제공하기 위해서는 버퍼가 사용되어야하며, 트리스, 인산염, hepes ( 4- 히드 록시 에틸 피페 라진 에탄 술폰산 ), 등등 ...... 그런 다음 가장 적합한 버퍼를 선택하는 방법은 무엇입니까?

일반적으로 사용되는 생물학적 완충제와 그 특성에 대해 살펴 보겠습니다.

1. 인산염 완충액

인산염 완충액은 가장 널리 사용되는 완충액입니다. 그것의 이차 해리 때문에, 완충기는 넓은 Ph 범위를 가지며 다양한 ph 값의 산성, 염기성 및 중성 완충액으로 구성 될 수있다 :

• 산성 버퍼의 준비는 직접 사용할 수 없습니다 ₂ 포 ₄ 또는 kh ₂ 포 ₄ , ph 범위는 1 ~ 5입니다.
• 알칼리성 버퍼는 직접 na를 사용할 수 있습니다. ₂ HPPo ₄ 또는 k ₂ HPPo ₄ , ph 범위는 9 ~ 12;
• 중성 완충액은 동일한 농도의 나 ₂ 포 ₄ 와 na ₂ HPPo ₄ 또는 kh의 동등한 농도 ₂ 포 ₄ 및 k ₂ HPPo ₄ 솔루션은 ph 5.5 ~ 8.5.

2. 트리스 완충액

트리스 완충액은 생화학 연구에 널리 사용됩니다. 그것은 약한 기반이며 일반적으로 "중성"범위에서 사용됩니다. 트리스 -hcl 완충액 : ph = 7.5 ~ 8.5; 트리스 - 인산염 완충액 : ph = 5.0 내지 9.0.

tris-hcl 이외에, tris는 다양한 유도체 화 완충액을 가지고 있습니다 :

• tbs = tris-hcl + nacl + kcl, 일반적으로 웨스턴 블 랏팅에서 면역 스테이닝 된 조직 또는 웨스턴 블 롯팅 막을 청소하는 데 사용됩니다.
• tbst = 트리스 -hcl + nacl + tween20, 웨스턴 블 랏팅에서 일반적으로 사용되는 막 완충액;
• te = tris-hcl + edta는 dna 염기를 보호하고 dna 안정화 및 보관에 종종 사용됩니다.
• tae = 트리스 염기 + 아세트산 + edta는 짧은 세그먼트 dna 전기 영동에서 널리 사용되는 버퍼 시스템이다.
• tbe = trisbase + 붕산 + edta는 장기간의 dna 전기 영동에 적합하며, 작은 조각들에 대해 우수한 분리 효과를 갖는다.

3. 글리신 완충액

글리신 완충액은 넓은 ph 범위와 광범위한 적용 범위를 가지고 있습니다. ph 범위는 2.0 ~ 11.0입니다. 가장 일반적인 시스템과 ph 범위는 다음 표에 나와 있습니다.

4. hepes 버퍼

hepes은 ph 7.2 ~ 7.4 범위에서 좋은 완충 능을 갖는 비이 온성 양쪽 성 완충액이다. 생화학 진단 키트, dna / rna 추출 키트 및 pcr 진단 키트에 일반적으로 사용됩니다.

표 1. 일반적으로 사용되는 버퍼의 장점과 단점

버퍼 선택을위한 일반 원칙 :

(1) 가장 중요한 것은 시스템에 필요한 ph 값을 결정하는 것입니다.

(2) 버퍼 시스템을 선택하면 pka가 하나 이상의 ph 단위를 변경하면 버퍼링 용량이 크게 감소합니다.

(3) 완충 시스템은 단백질의 활성이나 dna의 안정성에 영향을 주어서는 안되며 다른 이온으로부터의 간섭을 피하십시오;

(4) 마지막으로, 우리는 또한 온도의 영향을 고려해야합니다 : 온도뿐만 아니라 버퍼에 영향을 미치는뿐만 아니라 세포에 영향을 미칩니다. 대부분의 동물 세포는 37 ° C에서 7.0-7.5의 ph를 가지며 온도가 0 ° C로 떨어지면 8.0에 도달 할 수 있습니다.

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