유전자 재조합 기술의 발달과 함께 점점 더 많은 단백질이 외인성 숙주 세포에서 발현 될 수있다. 그러나 발현 과정에서 부정확 한 접힘은 봉입체를 형성하기위한 단백질 응집을 일으킨다. 한편으로는 발현 온도를 낮추고, 배양 시간을 단축하고, 유도 물질의 농도를 낮추는 것과 같이 상류 세포의 배양 조건을 변화시킴으로써 봉입체의 형성을 피할 수있다. 그러나 상황을 변경할 수없는 경우 봉입체를 정제해야합니다. 과염산 구아니딘봉입체의 정제에 큰 역할을합니다.

(1) 세포 파괴

박테리아를 원심 분리를 위해 수집하여 조악한 봉입체를 수득 하였다.

(2) 봉입체 세척

봉입체를 저 농도의 변성제 (예 : 2m 우레아) 또는 변성제를 함유하지 않는 완충액으로 세척하여 이종 단백질의 일부를 제거하고, 원심 분리에 의해 정제 된 봉입체를 수득한다.

(3) 봉입체의 용해

정제 된 봉입체는 고농도의 변성제, 예를 들어 8m 요소 또는 6m 염산 구아니딘을 함유하는 완충액을 사용하여 가용화된다.

요소 또는 염산 구아니딘 (캐스 50-01-1) 봉입체를 녹일 수있는 능력이 다릅니다. 우레아 및 구아니딘 히드로 클로라이드는 봉입체의 수소 결합에 강한 가역 변성 효과를 갖는 중도 형 변성제이지만 우레아의 능력은 구아니딘 히드로 클로라이드보다 느리고 약하다. 요구되는 우레아의 농도는 보통 8m이며, 이는 단백질 봉입체의 약 1/3에 대한 용출 효과가 약하며 용해도는 70 % ~ 90 %이다. 구아니딘 하이드로 클로라이드의 농도는 보통 6m이며 대부분의 봉입체를 용해시킬 수 있지만 용출 용량은 95 % 이상이다.

(4) 재생 및 정화

용해 된 봉입체는 정제되기 전에 희석 또는 투석에 의해 재생 될 수있다; 또는 정제 한 다음 다시 만든다. 대안 적으로, 용해 된 봉입체 단백질은 리 칼 레이션 및 정제를 동시에 달성하기 위해 온 - 칼럼 리 폴딩에 적용된다. (sieve), 금속 이온 킬레이트 크로마토 그래피 (ni2 +), 이온 교환 (iex) 및 소수성 (hic)은 고농도의 변성제를 허용 할 수 있으므로 온 컬럼 리 폴딩을 위해 다양한 크로마토 그래피 기술을 사용할 수 있습니다. 그러나 버퍼의 변성제 또는 다른 성분의 고농도가 단백질과 충전제 사이의 상호 작용에 영향을 미치는지주의를 기울일 필요가있다.

(5) 탐지 및 분석

최종적으로, 수득 된 샘플을 검출 및 분석하여 천연 단백질이 수득되는지를 확인한다. 일반적인 검출 방법은 생물학적 활성 검출, 원색 이색 성, 동적 광 산란 또는 겔 여과, 역상 크로마토 그래피 등을 포함한다.

봉입체 재생은 매우 복잡한 과정이며 많은 요인이 있습니다. 실험에서 다양한 시약 및 단백질의 농도, 작동 온도 및 재생 시간, 완충 용액의 조성 및 pH 값은 모두 실험 결과에 중요합니다. 염산 구아니딘은 고비용, 산성 조건 하에서의 침전, 봉입체를 용해시키는 과정에서 재생 후 단백질 이온 교환 크로마토 그래피와의 간섭 등의 단점이 있지만 용해도가 강하고 재조합 단백질의 공유 결합 변형을 일으키지 않는다.