최근 몇 년 동안 proteomics의 급속한 발전은 단백질 기능과 상호 작용 메커니즘에 대한 깊은 이해를 이끌어 냈습니다. 프로테오믹스 연구의 핵심은 단백질 추출입니다. 이 논문은 접착 세포, 부유 세포 및 조직으로부터 총 단백질 추출을 소개 할 것이다.

접착 성 세포로부터 총 단백질 (tf)의 추출

lysate (ph 8.5-9.0) 준비 : 50mm tris-hcl, 2mm edta, 100mm nacl, 0.5 % triton x-100, ph 값을 8.5-9.0으로 조정한다. 100μg / ml 리소자임, 1μl / ml 프로 테아 제 억제제 pmsf를 용액에 첨가한다.

약물 치료없이 :

(1) 배양 배지를 조심스럽게 버리고 배지를 거꾸로하여 배양액을 흡수시킨다.

(2) 세포를 3ml의 예냉 된 pbs (0.01m ph 7.2-7.3)로 세척하고, 세척액을 버리고, 3 회 반복 한 후, 플라스크를 얼음에 담그고;

(3) 용해 액을 첨가하고, 얼음상에서 30 분 동안 용해시키고;

(4) 세포를 깨끗한 스크레이퍼로 플라스크의 한면으로 긁어 낸 다음 피펫으로 원심 분리 관으로 옮겼다.

(5) 4 ℃ 및 12,000rpm에서 5 분 동안 원심 분리;

(6) 상등액을 원심 분리 튜브로 옮기고 -20 ℃에서 보관 하였다.

마약 치료와 함께 :

마약의 영향으로 인해 일부 세포는 용액으로 떨어지게되므로 상기 조작 이외에 배양 배지의 세포도 수집해야합니다.

(1) 원심 분리 관에 배양액을 붓고 2500rpm에서 5 분간 원심 분리한다.

(2) 상청액을 버리고, 일정량의 pBS를 첨가하고 부드럽게 불어 피펫으로 씻은 다음 5 분 동안 원심 분리를 한 번 반복한다.

(3) 상청액을 버리고, 용해 액을 첨가하여 얼음 위에 30 분간 놓는다;

(4) 이전의 용 해물과 혼합하고 4 ℃에서 12 분간 원심 분리하고 원심 분리 관에서 상층 액을 취하여 -20 ℃에서 보관한다.

현탁 세포로부터 총 단백질 추출

(1) 현탁 세포를 침전시키고, 2500rpm에서 10 분간 원심 분리하고, 상등액을 버렸다.

(2) 억제제 함유 프리 콜린 단백질 추출 시약을 첨가하는 단계;

(3) 부드럽게 15 분 동안 흔들어주십시오.

(4) 14,000rpm에서 15 분간 원심 분리하고, 침전물을 버리고, 즉시 상층 액을 새로운 원심 분리 관으로 옮긴다.

조직 내 총 단백질 추출

(1) 소량의 조직을 1 ~ 2ml 균질기에 넣고 조직을 가능한 한 작게 자른다.

(2) homogenizer, homogenate, ice bath에서 400μl의 단일 세제 용해 액을 첨가한다;

(3) 가능한 한 조직을 파괴하라.

(4) 30 분간 용균시킨 후 원심 분리 관에 옮기고 12000rpm, 4 ℃에서 5 분간 원심 분리 한 후 상층 액을 -20 ℃의 원심 분리 관에 보관 하였다.

단백질 샘플 추출은 후속 분석을위한 전제 조건입니다. 단백질 분리의 이상적인 방법은 가능한 한 모든 단백질을 포함해야하며 오염되지 않으며 후 처리가 간소화됩니다. 다른 시스템, 다른 방법, 그래서 우리는 최상의 분석 결과를 얻기 위해 적절한 방법을 선택해야합니다.

소주 yacoo 과학 공동으로 수정., LTD.