트리 신생화학 및 분자 생물학을위한 양성 이온 완충액이며, ph버퍼 범위는 7.4-8.8이다. 작은 펩티드를 분리하기 위해 sds-page 동안, tricine은일반적으로 laemmli 버퍼에서 글리신 대신에 사용됩니다. tricine-sds-page 젤분자를 가진 단백질의 동정을위한 탁월한 성능을 가지고있다.10kd 이하의 무게. 종래의 sds-page는 이러한 것들을 분리하는 데 사용됩니다단백질, 막연한 스트립, 지나치게 부드러운 젤과 같은 몇 가지 문제가 발생할 수 있습니다. 이리우리는 tricine-sds-page gel의 준비 방법을 설명합니다.

시약 :

양극완충액 (+) : 200 mm 트리스 ph = 8.9

음극완충액 (-) : 100mm 트리스 / 100mm 트리시나 / 0.1 % SDS

젤라틴완충액 : 3.0m 트리스, ph = 8.45 / 0.3 % SDS

스태킹아크릴 아마이드 : 48 % 아크릴 아마이드 / 1.5 % 비스 - 아크릴 아마이드

분리아크릴 아마이드 : 46.5 % 아크릴 아마이드 / 1.5 % 비스 - 아크릴 아마이드

견본완충액 (20 ml) :

5ml 0.5m 트리스 (phris) = 6.8; 4 ml 20 % sds; 1 ml 2- 메르 캅토 에탄올; 4 ml 50 % 글리세롤;브로 모 페놀 블루 0.004 g; 6 ml ddh ₂ 영형.

분리 겔 :

15 %겔 : 2 ml의 분리 된 아크릴 아미드, 2 ml의 겔 완충액, 2 ml의 50 % 글리세롤.

10 %겔 : 1.22 ml의 정지 아크릴 아미드, 2 ml의 겔 완충액, 2 ml의 50 % 글리세롤 및 0.78ml ddh ₂ 영형.

그만큼중합은 75 %의 10 %과 황산 암모늄 (aps) 및7.5㎕의 테트라 에틸 에틸렌 디아민 (temed).

스태킹 겔 :

0.25겹쳐 쌓은 아크릴 아미드 1 ml, 겔 완충액 0.75 ml, ddh 2 ml ₂ o, 20 ul 10 %aps, 2 ul temed.

그만큼스태킹 및 분리 겔은 동시에 중합되어야하며,그런 다음 스태킹 젤을 분리 접착제 위에 붓습니다 (신중하지만 신속하게 붓습니다).

샘플로드 및전기 영동 :

...에 대한minigel, 우물 당 5-10 ul가 가장 좋은 결과를줍니다. 우물에 시료를 매우 조심스럽게 층을 이루고,적재하기 전에 중합되지 않은 아크릴 아마이드를 세척하십시오. 후샘플을 로딩하면서, 25-35 mA의 일정한 전류가 미니 겔 셋업에 설정되었다전기 영동 분석 용. 달리기 중에 거품이 맨 위에 나타납니다.캐소드와 추가 캐소드 버퍼를 추가해야합니다.

그만큼tricine-sds-page 젤의 준비에 관한 위의 설명은연구원의 사례. 그러나 특정 실험에서,실험에 적합한 적당한 준비 방법을 찾는다.실제 상황.

소주 yacoo 과학 공동으로 편집.