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단백질 정제를 위해 필요한 성분은 무엇입니까?

2022-02-15 10:42:43


단백질은 일반적으로 조직 또는 세포의 복합 혼합물에 존재하므로 구조 연구 및 시험관 생화학 분석과 같은 많은 실험 응용에서 정제가 필요합니다. 단백질 정제는 대부분의 기능성 단백질을 얻는 목적을 달성하기 위해 원료와 분리하기위한 그들의 상이한 물리적 특성에 기초한다. 그 중에서도 단백질 정제 솔루션이 중요한 역할을 담당 했으므로 솔루션에 어떤 성분이 필요합니까?


버퍼 시스템


단백질은 단백질 접힘 상태, 용해도 및 활성에 돌이킬 수없는 영향을 미치지 않도록 양호한 완충 환경에서 보관해야합니다. 생화학 실험은 일반적으로 7.4의 pH 값을 사용하지만, 단백질 정제 실험에서 단백질 등전점도 고려해야한다. 등전점에서, 단백질 분자는 양전하와 음전하가 동일한 양성 전하의 형태로 존재하며, 순 전하량은 0이다. 그들의 입자는 쉽게 충돌하고 응집되어 석출물을 형성 할 수있다. 그러므로, ph는 단백질의 등전점에 따라 설정되어야한다. 좋은 버퍼에는 다음과 같은 특징이 있어야합니다.


수용성;
화학적 안정성;
필요한 ph 범위에서 좋은 버퍼링 용량;
분석 및 실험 적용 조건과의 우수한 호환성;

다른 용질과의 좋은 호환성.


공통 버퍼 시스템은 다음 표에 나와 있습니다.

버퍼 시스템
ph 장점들
단점
트리스
7.5 ~ 9.0
준비 과정은 간단합니다. 시스템에 거의 영향을주지 않는다.
온도 나 희석에 따라 ph가 변한다.
인산
5.8 ~ 8.0
ph는 온도에 따라 변하지 않는다.
일반적인 ca2 +, mg2 + 및 중금속 이온으로 침전물을 형성하기 쉽다. 특정 생화학 적 과정과 대부분의 효소 활동을 억제한다.
대모
6.5 ~ 7.9
생리 ph에서 높은 버퍼링 용량 범위
고압 증기 멸균 할 수 없다. 온도에 따라 ph가 어느 정도 변한다.
헤파
6.8 ~ 8.2
높은 용해도, 화학 반응, 거의 환경 적 영향에 영향을주지 않습니다.
고압 증기 멸균 할 수 없다. ph는 온도에 따라 어느 정도 변한다. 특정 조건에서 자유 라디칼 생성


환원제


단백질에 시스테인 잔기가 포함되어 있으면 시스테인 잔기 사이의 산화로 인해 단백질 응집이 생길 수 있습니다. 이 경우 버퍼에 환원제를 첨가하는 것이 종종 필요하다. 일반적으로 사용되는 환원제는 β- 머 캅토 에탄올 (bme), 디티 오 트레이 톨 (dtt) 및 트리스 - (2- 포르 밀 에틸) 포스 핀 히드로 클로라이드 (tcep-hcl)이다. bme는 하나의 메르 캅토 그룹을 포함하며, 이는 가장 나쁜 환원성을 지니 며 2 ~ 3 일만 유지할 수 있습니다. dtt에는 3 개의 7 일 동안 bme보다는 더 강한 2 개의 메르 캅 토기가있다. tcep의 감소 능력은 bme 및 dtt의 것보다 강하고, 그 역할은 2 내지 3 주 동안 유지 될 수있다. tcep는 강한 환원 능력, 높은 선택성뿐만 아니라 산성 또는 알칼리성 조건에서보다 안정하다.


프로테아제 억제제


프로테아제 저해제는 넓은 의미에서, 프로테아제 분자의 활성 부위와 결합하여 프로테아제 활성이 감소되거나 심지어는 사라지지만 효소 단백질을 변성시키지 않는 물질을 지칭한다. 그것은 내인성 프로테아제에 의한 표적 단백질의 효소 분해를 막기 위해 용해 완충제 및 정제 공정의 초기 단계에서 종종 첨가된다. 일반적인 프로테아제 저해제는 다음과 같습니다 :


류 펩틴 - 세린 및 시스테인 프로테아제 억제제;

위장 억제 폴리펩티드 - 아스파르트 산 프로테아제 억제제;

pmsf-serine protease 억제제


표적 단백질이 금속 단백질 분해 효소에 의해 분해되는 것을 방지하기 위해 ca2 + 또는 mg2 +를 킬 레이팅 할 수있는 금속 킬 레이터 edta 또는 egta와 같은 다른 첨가제가있다. 단백질 구조를 안정화시키고 용해도를 향상시키는 아르기닌 키나아제; 이온 안정제, 용해도 향상 등을 포함한다.


단백질 분리 및 정제는 후속 실험의 성공에 직접적인 영향을주는 복잡하고 중요한 작업입니다. 그러나 복잡한 혼합물로부터 하나의 단백질을 추출 할 수있는 단일 또는 일련의 기성 제조 방법이 없으므로 실험자는 고순도 제품을 얻는 데 가장 적합한 방법을 선택할 필요가 있습니다 .


소주 yacoo 과학 공동으로 편집.

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